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cas:35013-72-0,Biotin-NHS ester,生物素-N-羥基琥珀酰亞胺酯的介紹

2025-10-31 [115]

Biotin-NHS ester(生物素-N-羥基琥珀酰亞胺酯)是一種常用的生物素化試劑。

一、核心特性

  1. 化學(xué)結(jié)構(gòu)

    • 由生物素(維生素H)與N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)通過酯鍵連接而成,分子式為C??H??N?O?S,分子量約341.4 g/mol。

    • 結(jié)構(gòu)中包含一個短間隔臂(spacer arm),減少空間位阻,提高生物素與親和素(如鏈霉親和素)的結(jié)合效率。

  2. 反應(yīng)活性

    • 胺反應(yīng)性:NHS酯基團可高效與伯胺基團(-NH?)反應(yīng),形成穩(wěn)定的酰胺鍵。這一特性使其成為標記蛋白質(zhì)、抗體、多肽等含胺分子的理想工具。

    • 反應(yīng)條件:通常在堿性緩沖液(pH 7-9)中進行,反應(yīng)快速且不可逆。

  3. 物理性質(zhì)

    • 外觀:白色結(jié)晶性固體。

    • 溶解性:難溶于水,易溶于有機溶劑(如DMSO、DMF)。

    • 穩(wěn)定性:需低溫(-20°C)保存,避免反復(fù)凍融。

二、合成方法

Biotin-NHS ester的合成通常通過DCC(二環(huán)己基碳二亞胺)偶聯(lián)反應(yīng)實現(xiàn),步驟如下:

  1. 原料準備

    • 生物素(D-biotin)作為羧酸供體,NHS作為羥基受體。

    • 加入DCC作為縮合劑,促進羧酸與羥基的脫水縮合。

  2. 反應(yīng)過程

    • 在有機溶劑(如DMF)中,生物素與DCC反應(yīng)生成活性中間體(O-?;愲澹?。

    • NHS攻擊中間體,取代DCC,形成Biotin-NHS ester。

  3. 純化

    • 通過結(jié)晶或色譜法(如硅膠柱層析)純化產(chǎn)物,去除未反應(yīng)的原料和副產(chǎn)物。

三、應(yīng)用場景

  1. 生物分子標記

    • 蛋白質(zhì)標記:將生物素標記到抗體、酶或受體蛋白的賴氨酸殘基(側(cè)鏈含-NH?)或N端,用于免疫檢測、流式細胞術(shù)等。

    • 多肽/核酸標記:標記含胺基團的多肽或核酸探針,便于后續(xù)分離或檢測。

  2. 親和純化

    • 生物素標記的分子可通過鏈霉親和素磁珠或?qū)游鲋M行高效純化,廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究。

  3. 細胞成像與檢測

    • 結(jié)合熒光標記的鏈霉親和素,實現(xiàn)生物素化分子的可視化追蹤,用于細胞定位或信號通路研究。

  4. 藥物遞送系統(tǒng)

    • 生物素化納米顆粒(如殼聚糖硫化銅納米顆粒)可通過生物素-親和素相互作用實現(xiàn)靶向遞送,提高藥物在腫瘤組織的富集效率。

四、注意事項

  1. 反應(yīng)控制

    • 避免過量NHS酯,防止非特異性標記。

    • 反應(yīng)后需通過透析或脫鹽柱去除未反應(yīng)試劑。

  2. 兼容性

    • 某些蛋白質(zhì)(如富含賴氨酸)可能因過度標記影響活性,需優(yōu)化標記比例。

  3. 安全性

    • DCC為潛在致敏物,操作時需佩戴防護裝備。

    • 廢棄物按有機溶劑處理規(guī)范處置。

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